【回答】

1. β-ラクタマーゼとは

　β-ラクタマーゼはβラクタム系抗菌薬のβラクタム環を加水分解し抗菌力を失わせる細菌産生酵素の一つであり, ペニシリナーゼ (ペニシリン分解酵素) とセファロスポリナーゼ (セファロスポリン分解酵素) に大別され, 染色体遺伝子またはRプラスミドに支配されています。β-ラクタマーゼは酵素構造や遺伝学的にみて４種類 (class A_D) に分類され, 酵素活性にセリン残基をもつセリン-β-ラクタマーゼ (class A, C, D) と亜鉛をもつメタロ-β-ラクタマーゼ (class B) に大別されます。最近問題視されているextended　spectrum　β-lactamase (ESBL) は広範囲の薬剤を分解するβ-ラクタマーゼ拡張型として主にclass Aに含まれています。

2. β-ラクタマーゼ試験の目的

　β-ラクタム系抗菌薬の使用に際し, 標的となる細菌がβ-ラクタマーゼ産生菌株か否かの情報はとても重要であり, 菌種と抗菌薬の種類によって若干異なるものの, 感受性検査で≪感性≫と判断されたとしてもβ-ラクタマーゼ産生菌株の場合には治療効果が期待できないことから, ≪耐性≫と判断して報告することになります。

　一般的にβ-ラクタマーゼ試験が必要な菌種としては, Staphylococcus属, Haemophilus 属, Enterococcus　faecalis, Neisseria　gonorrhoeae, Moraxella　catarrhalis, Prevotella属, Porphyromonas属などがあげられます。EnterobacteriaceaeやPseudomonas　aeruginosaでは感受性検査の成績と一致しない場合がみられることから通常はβ-ラクタマーゼ試験を実施していませんでしたが, 先に述べたESBLの出現によりEscherichia coliやＫlebsiella　pneumoniaeを中心に検査することが求められています。

3. β-ラクタマーゼ試験方法

　検査法としては, ニトロセフィンがβ-ラクタム環の開裂により発色することを利用した≪ニトロセフィン法≫, PCGの加水分解により生じたペニシロン酸をpH変化で捕らえる≪アシドメトリック法≫, PCGの加水分解により生じたペニシロン酸がヨウ素を還元することから澱粉とヨウ素を用いて判定する≪ヨードメトリック法≫が知られています。このうち広範囲の細菌に応用が可能であるニトロセフィン法が推奨されています。

1) ニトロセフィン法 (セフィナーゼ: ベクトン・ディッキンソン)

• 試薬1: 可溶性澱粉0.1 ｇ＋寒天0.1 ｇ＋精製水10 mlを高圧蒸気滅菌したもの
• 試薬2: 1.2 Mヨウ化カリ・0.16 Mヨウ素を精製水100 mlに調整
• 試薬3: PC-G (またはABPC) 20 mg／ml溶液
• 試薬4: CET 20 mg／ml溶液

　一般的にはニトロセフィン法が推奨されているが, staphylococciでは1時間まで反応を観察することが大切である。いずれにしても陽性・陰性の対照菌株を置いて検査することが望ましい。