まず, 固定に用いるメタノールの濃度。そして固定はスライドに滴下するのか, それともメタノール液につけて固定するのかが分かりません。
また, パイフェル液はフクシン液を薄めるとのことですが, もとのフクシン液の作り方が良く分かりません。
【回答】
グラム染色B & M法のメタノール固定法とパイフェル液に関する質問にお答えします。
1. メタノールの濃度？
メタノール含有99.8%です。実際には市販品Methyl Alcohol SG (試薬特級規格適合品)
またはこれに準ずるものであれば十分です。
2. 固定法は滴下か？つけるのか？
どちらでも良いのですが, 塗抹面に十分メタノールが浸透することが大切です。私たちは10枚程度が収まるガラス容器
(染色瓶) にメタノールを満たし, この中に約1分間浸しております。
3. フクシン液の作り方？
(1)フクシン原液 (エタノール飽和液): 塩基性フクシン11 gを乳鉢に入れ,
95%エタノール100 mlを徐々に加え, つぶしながら溶かし, 濾過する。
(2)5%石炭酸水溶液: 湯せんにて, 液状としたフェノール (98%含有) 5 mlを精製水で溶解し,
全量100 mlとする。
(3)石炭酸フクシン液: (1)のフクシン原液10 mlと(2)の5%石炭酸水溶液100
mlを混和したもの。
(4)パイフェル液: (3)の石炭酸フクシン液を精製水で5〜10%に希釈したもの。
臨床検査部門に限らず, グラム染色を用いる施設は多方面にあると思います。いろんな分野でグラム染色検査に悩んでおられる方には是非B & M法をお試しいただければ幸いです。
（大手前病院・山中喜代治）