【回答】 
　微生物検査の現場では様々なグラム染色が行われています。ここではハッカー (Hucker) の変法で説明します。 

1. 検査材料をスライドグラスに塗布する。(ここで検査材料を厚く塗布すると綺麗な染色ができません) 
 
2. 自然乾燥した後, 火炎固定する。(固定方法にはアルコールやアセトンでの方法もあります) 
 
3. クリスタル紫液で約1分間染色する。(染色液は“検査材料を塗布した面”に満載する) 
 
4. 水洗。(水道の弱い流水をスライドグラスの裏側―“検査材料を塗布していない面”に流して, 十分水洗する) 
 
5. 水気を切り, ルゴール液を“検査材料を塗布した面”に満載し, 約1分間媒染する。 
 
6. 水洗。(水道の弱い流水をスライドグラスの裏側―“検査材料を塗布していない面”に流して, 十分水洗する) 
 
7. 水気を切った後, エタノールで脱色する。(この部分が最も重要です) 
　スライドグラスを斜めに持ち, “検査材料を塗布した面”の上の方からエタノールを掛ける。糸状の紫液が流れなくなった時点で脱色完了とする。(下の写真は, 分かり易いように敢て厚めに検査材料を塗布してあります) 
 
8.水洗。(水道の弱い流水をスライドグラスの裏側―“検査材料を塗布していない面”に流して, 十分水洗する) 
 
9. 水気を切った後, サフラニンで30秒〜1分間, 後染色する。(染色液は“検査材料を塗布した面”に満載する) 
 
10. 水道の弱い流水をスライドグラスの裏側―“検査材料を塗布していない面”に流して, 水洗し, 乾燥後観察する。