【回答】
　馬尿酸は, 馬尿酸加水分解酵素 (hippulicase) によって，安息香酸とグリシンに分解されます。ニンヒドリン試薬は，このグリシンを検出するための試薬ですが，質問者が実施されているのは“Hwang-Edererの試験”ではないかと思います。「新 細菌培地学講座−下−」(近代出版) に記載されているこの方法の手順について紹介します。

Hwang-Edererの試験試液

・馬尿酸ナトリウム1%水溶液
　ネジ栓付き試験管に0.4 ml ずつ分注し，−20℃で凍結保存する。

・ニンヒドリン溶液
　ニンヒドリン　　　 3.5 g
　アセトン，ブタノール等量混合液　100 ml
　密栓して4℃に保存する。

Hwang-Edererの試験方法

　凍結しておいた試験試薬 (馬尿酸ナトリウム1%水溶液) を解凍して，培養した新鮮な菌1白金耳量を接種し，35℃に2時間置いた後，ニンヒドリン溶液0.2 ml (5滴) を加えて，35℃に10分間放置する。「陽性」のときは青紫色となり，無色またはうすい紫色にとどまるものは「陰性」とする。

　この方法は，予め試験に必要な量の0.4 mlを試験管に分注して凍結し，解凍した試験管に直接，被検菌を接種するという方法です。つまり，馬尿酸ナトリウム1%水溶液 0.4 ml に対して，ニンヒドリン溶液を0.2 ml 加えることになります。これが正式な方法だと思いますが，カッコ内に“5滴”と記載しているように，厳密なものではなく，大まかな目安だと思います。ただ, 冷蔵保存したニンヒドリン試薬は，繰り返し使用していくうちに劣化してくることがありますので，馬尿酸加水分解試験が陽性の菌株 (Streptococcus agalactiaeなど)を用いて試薬の性能を確認しておくことも大切です。市販品も発売されています。

【質問者からのお礼と追加質問】
　この度は, 一つ一つ丁寧に教えて頂きありがとうございました。私が何故, この質問をしたか理由を書くべきでした。すみません。Campylobacterの分離をしています。その工程の中にあるこの試験の方法を調べたのですが, 見つかりませんでした。今回のこの回答をもとにもう一度実験してみます。またネット上で見たことなのですが, ステック法による市販品 (ヤトロン社) のものは10分程度で結果が出るとのことですが, 詳細を教えて頂けませんでしょうか。やはり検査をする時間がかかるのがこの試験なのです。お忙しい中, メールを送ってしまい, すみません。宜しくお願い致します。

【回答】
「RID Zyme HIP-Mテスト」の名称で販売されています。試薬構成は (1) 馬尿酸ナトリウムを染み込ませて乾燥させたHIP-Mスティック, (2) 反応用専用緩衝液, (3) ニンヒドリンを染み込ませて乾燥させたニンヒドリン・ディスク, (4) ニンヒドリンを抽出する2-メトキシエタノールです。予め, ニンヒドリン抽出液にニンヒドリン・ディスクを入れて抽出します (保存は遮光密封, 2〜10℃で2週間, ?10℃以下で1ケ月有効)。ガラス小試験管に専用緩衝液を1滴入れ, 試験菌を1コロニー, HIP-Mスティックで釣菌し, 試験管に入れ, パラフィルムで覆い, 35〜37℃1時間反応させます。室温に5分間放置した後, 抽出したニンヒドリン溶液を15μl滴下し, 35〜37℃で10分間反応させます。濃紫色に呈色したら「陽性」と判定します。Campylobacter jejuniとStreptococcus agalactiae (B群溶連菌) の同定に使用します。頻繁に分離同定試験がある施設では便利な市販品といえます。